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  PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO   I. OBJETIVO:- Los alumnos deben de conocer los principales principios para la preparación de los medios de cultivo. II.   FUNDAMENTO: Para obtener colonia de microorganismos es necesario utilizar determinados sustratos nutritivos (medios de cultivo) en los cuales los microorganismos pueden desarrollar todos sus procesos vitales. Los medios de cultivo deben de reunir los siguientes requisitos: -Deben de contener Nitrógeno, Carbono, Oxígeno, Hidrógeno; Sales Minerales (sodio, potasio, etc.); (Fe, Cu, Cr, Zn, etc.) y factores de crecimiento (vitaminas, hormonas, etc.) todas las sustancias deben ser fácilmente asimilables por los microorganismos. -Todos tienen un PH específico -La presión osmótica en el medio debe ser igual que dentro de la célula microbiana. -Los medios de cultivo deben ser esterilizados. III.   EQUIPOS Y MATERIALES: - Autoclave - Cocinas - Baño Maria - Balanza, y Estufa - Material de vidrio: (Balones, placas Petri, tubos de ensayo, pipetas y matraces). - Agares y medios de cultivo  IV. PREPARACIÓN: - Esterilizar los materiales y la mesa de trabajo. -En lo posible se prepara máximo 2 Lts. por recipiente en la balanza digital calcular el peso por regla de tres. -Para la preparación de medios de cultivo se utiliza agua limpia, destilada neutra. -Los recipientes que se utilizarán se lavan esmeradamente con el fin de eliminar cualquier sustancia extraña. -Se preparan según las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio de cultivo. -Los medios que contienen Agar o gelatina deben ser calentados para obtener su disolución. -Con cuidado los medios que no contienen Agar ni gelatinas se pueden disolver por lo general en agua fría o bajo ligero calentamiento. -Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en porciones más pequeñas, si las normas indicadas en el envase nos indican otra cosa. -la esterilización de los medios de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 121°C durante 15 minutos. -Distribuir en recipientes como placas de petri, tubos, etc. -Luego se coloca un algodón y papel antes de esterilizar para evitar la contaminación al trasladarlo del autoclave al lugar de trabajo  TIPOS DE AGARES Y CALDOS DE CULTIVO:  Agar-azul de China-lactosa Envases unitarios: 70 g; 500 g Finalidad de empleo  Medio de cultivo electivo para la diferenciación de microorganismos fermentadores y no fermentadores de lactosa, así como para la determinación del número de gérmenes en leche Puesto que el crecimiento de cocos no resulta perjudicado, junto con las bacterias del grupo coli-aerogenes, también pueden desarrollarse libremente estafilococos y estreptococos.  Modo de actuar Este medio de cultivo, exento de substancias inhibidoras, contiene lactosa como sustancia de reacción, cuya degradación a ácido se manifiesta por un viraje del indicador de pH azul de China que pasa de incoloro a azul oscuro. Composición   (g por litro) Extracto de carne   3,0 Peptona de caseína Lactosa 5,0 Azul de China 10,0 Cloruro sódico 0,375 Agar-Agar 5,0 12,0 Preparación 35 g del producto se suspenden en 1 litro de agua recién destilada o desmineralizada, se dejan remojar durante 15 minutos y se hierven a vapor fluente hasta solución completa. Tras su distribución en tubos, a razón de 10 ml, se efectúa la esterilización en autoclave (15 minutos a 121° C). Valor del pH del medio de cultivo listo para el uso, a 30° C: 7,0 ± 0,2 Empleo Para la determinación del número de gérmenes se utiliza el material objeto de ensayo en una serie de diluciones realizadas con agua corriente estéril, con el medio de cultivo fundido y enfriado en baño de agua hasta 45 a 50° C. Se incuba a 30° C durante 24 a 48 horas.  Interpretación: Colonias Microorganismos De azul oscuro con halo azul, 3-4 mm. Escherichia coli.  Azul-verdosas, opacas, 0 aprox. 1 mm. Estafilococos. De azul claro, opacas, 0 aprox. 0,5 mm. Enterococos. Transparentes, a veces con halo claro. Lactosa-negativos. CONCLUSIONES: RECOMENDACIONES: BIBLIOGRAFIA -   PEARSON, D. 1986. Técnicas de laboratorio para el análisis de alimentos. Editorial Acribia. España -   AGURTO, T. 1989. Manual de técnicas de Microbiología. Editorial La Pluma Fuente S.A. Perú
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