UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA TESIS I

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  UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA TESIS I Capacidad Antioxidante del Néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila)
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA TESIS I Capacidad Antioxidante del Néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el 2,2 difenil 1 picrilhidrazilo (DPPH*) AUTORES: ASESOR: REYNOSO LEYVA, Elva Milagros RODRÍGUEZ FLORES, Roberto Carlos JOSÉ GAVIDIA VALENCIA TRUJILLO - PERÚ 2014 ÍNDICE Pag. RESUMEN i ABSTRACT... ii I. Introducc 1 II. Objetivos Objetivo General Objetivos Específicos.. 6 III. Material y Métodos Materiales Métodos.. 8 IV. Resultados.. 15 V. Discusión.. 17 VI. Conclusiones. 20 VII. Referencias Bibliográficas...21 VIII. Anexos 24 RESUMEN Se determinó la capacidad antioxidante del néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el DPPH*. La muestra consistió en néctar de durazno con sábila al 25 % en sistema diluido (10/100ml).mediante el método de Brand Williams, en el cual se mezcla con DPPH* 0,1 Mm, a estos se realizó la lectura de absorbancia a 517nm. Se concluye que la capacidad antioxidante del néctar de Prunus pérsica durazno al 25 % genera la captación de radicales libres, demostrando así su capacidad antioxidante. Asimismo, el porcentaje de captura del DPPH aumenta a medida que se incrementa las concentraciones y el tiempo.. Palabras claves: Néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila), DPPH*, capacidad antioxidante. i ABSTRACT The antioxidant capacity of Prunus persica nectar (peach) and Aloe vera (aloe) In vitrio with DPPH * was determined. The sample consisted of peach nectar with aloe to 25% in dilute system (10 / 100ml) By filling WILLIAMS BRAND method, which is mixed with DPPH * 0.1 Mm, these absorbance reading was performed 517nm. It is concluded that the antioxidant capacity of Prunus persica nectar peach 25% uptake generates free radicals, thus demonstrating its antioxidant capacity. Also, the rate of capture of DPPH increases as the concentrations and the time increases. Keywords: Prunus persica Nectar (peach) and Aloe vera (Aloe), DPPH *, antioxidant capacity. ii JURADO EVALUADOR: Dr. Salomón Alva Bazán PRESIDENTE Mg. José Gavidia Valencia MIEMBRO DEL JURADO Mg. Francisco Saavedra Suarez MIEMBRO DEL JURADO Dedico y agradezco este trabajo: DEDICATORIA Primero a Dios por estar conmigo en cada paso que doy, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente, y por haber puesto en mi camino aquellas personas que han sido mi soporte y comprensión durante la elaboración de este trabajo. Con todo cariño y mi amor para mis padres ESTEBAN y OLGA que hicieron todo en la vida que yo pudiera lograr mis sueños, por motivarme y darme la fuerza cuando sentí que el camino se terminaba. A mi hijo DAIR por la paciencia y comprensión porque que él tuvo que soportar largas horas sin compañía de su mamá, todo lo que representa en mí, y me inspira a ser mejor cada día por ti. A mis Hermanas INES, JENY y SHIRA Por aconsejarme siempre y brindarme el apoyo constante para luchar por mis objetivos. Elva Milagros Reynoso Leyva Dedico y agradezco este trabajo: A mis Padres PABLO Y BERTHA por ser el pilar, fundamental en todo que soy, por su incondicional apoyo perfectamente mantenido a través del tiempo A mi hija ESTEFANY para que vea siempre en mí un ejemplo a seguir hacia adelante A mí amada LIZZIE compañera de vida, mi esposa por estar conmigo, por su amor, comprensión, paciencia y fortaleza que permitieron no solo trabajar sino concluir con este trabajo Roberto Carlos Rodríguez Flores AGRADECIMIENTO A nuestro asesor por los consejos y el apoyo que nos brindó en todo momento para poder realizar este trabajo: Mg. José Gavidia Valencia A los distinguidos miembros del jurado calificador por sus consejos y recomendaciones dadas para llevar a cabo la presentación de nuestro trabajo: Dr. Salomón Alva Bazán Mg. Francisco Saavedra Suarez También agradecemos nuestros compañeros y amigos Katya Tarrillo Delgado y Adrián David Rodríguez Jiménez por su constante apoyo y labor sobre el trabajo de Capacidad Antioxidante del Néctar de prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el 2,2 difenil 1 picrilhidrazilo (DPPH*) A todas aquellas personas que hicieron posible el desarrollo del presente trabajo. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO: En cumplimiento con las normas dispuestas en el reglamento de grados de la Escuela de Pregrado de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a su consideración la tesis I: Capacidad Antioxidante del Néctar de prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el 2,2 difenil 1 picrilhidrazilo (DPPH*) Expresamos nuestro más sincero reconocimiento a todos nuestros docentes que han contribuido con sus enseñanzas y experiencias en nuestra formación profesional. Trujillo, Diciembre del Reynoso Leyva, Elva Milagros Rodríguez Flores, Roberto Carlos INTRODUCCIÓN En los últimos años, existe un creciente interés por el estudio de los antioxidantes debido a sus efectos positivos en la prevención de ciertas enfermedades, debido a que los antioxidantes frenan la reacción de oxidación, pero a costa de inactivarse ellos mismos. En el organismo dispone de sistemas de defensa antioxidantes que actúan impidiendo la formación de radicales libres, bloqueando su propagación o interaccionando directamente con ellos. Integran este sistema la superóxido dismutasa, catalasa, glutatión, grupos sulfhidrilos (SH), entre otros. También es posible que se ingiera con la dieta sustancias naturales o de origen sintético con capacidad antioxidante 1,2. Los antioxidantes son compuestos que protegen a las células de los daños causados por la oxidación, funcionan en contra de la oxidación o la previenen. Durante el metabolismo, los átomos pueden perder electrones; a esta pérdida se le conoce como oxidación. Tales átomos son muy inestables y se les denomina radicales libres 3. El problema de salud se produce cuando el organismo humano tiene que soportar un exceso de radicales libres, producidos mayormente por contaminantes externos, como pueden ser componentes de los alimentos más susceptibles a la alteración por oxidación de aceites y grasas compuestas por lípidos saponificables, el consumo de aceites vegetales hidrogenados, tales como la margarita y el consumo de ácidos grasos trans como las grasas de las carnes y de la leche contribuyen a los radicales libres 2, 3. Los radicales libres son compuestos caracterizados por tener uno o más electrones desapareados, situación que los torna altamente reactivos, un electrón desapareado incrementa la reactividad química de un átomo o molécula con respecto a su correspondiente no radical, dado que busca con avidez completar su par electrónico. Los radicales se clasifican de acuerdo con el átomo que posee el electrón desemparejado, por consiguiente hay radicales centrado en el oxígeno, centrados en el nitrógeno, centrados en el carbono, etc. Por lo general, los radicales centrados en el carbono que se encuentran en los seres vivos resultan de la reacción de los primeros sobre diversos tipos de biomoléculas no radicales. En el ser humano, los radicales libres se generan como: anión superóxido (O - 2 ), radical hidroxilo (OH - ), y radical alcoxilo 4,5. La captación de radicales es el principal mecanismo de acción de los antioxidantes en los alimentos, se han desarrollado muchos métodos en los que se mide la capacidad antioxidante a través de la captación de radicales libres sintéticos en solventes orgánicos polares, por ejemplo metanol, a temperatura ambiente. Los radicales libres más usados son del tipo 2,2 difenil 1-picrilhidrazilo (DDPH) y 2,2-azinobis (3 etilbenzotiazolina ácido sulfonico) (ABTS). En el método del DPPH se mide la captación de este radical a través de la disminución de la absorbancia, medida a 515nm, que se produce por reducción de un antioxidante. El α-tocoferol, reacciona rápidamente con los radicales DPPH*. Sin embargo, una serie de reacciones secundarias lentas pueden causar una disminución progresiva de la absorbancia, por lo que puede no alcanzarse el estado estacionario hasta el cabo de varias horas. En la mayor parte de los casos el método del DPPH*, se ha usado para medir la captación de radicales después de 15 ó 30 minutos iniciada la reacción 5. Existen diversos métodos para evaluar la actividad antioxidante, ya sea en in vitrio o in vivo, una de las estrategias más aplicadas en las medidas in vitrio de la capacidad antioxidante total de un compuesto, mezcla o alimento, consiste en determinar la actividad del antioxidante frente a sustancias cromógenas de naturaleza radical; la perdidas de color ocurre en situaciones complejas invitrio, la capacidad antioxidante de una mezcla no viene dada solo por la suma de las capacidades antioxidantes de cada de sus componentes, también depende del microambiente en que se encuentra el compuesto, y los compuestos interactuando entre si pudiendo producir efectos sinérgicos o inhibidores. Por otra parte, es necesario considerar que los ensayos en vivo pueden presentar algunos inconvenientes, como la adaptabilidad en respuesta al aumento del estrés oxidativo 6. Los radicales libres son compuestos muy agresivos que atacan todas las moléculas celulares, sean estructurales o funcionales: hidratos de carbono, proteínas, ácidos grasos de fosfolípidos e incluso los ácidos nucleicos, tanto los ácidos ribonucleicos como el ácido desoxirribonucleico que, como es sabido, constituye el material genético celular 7. El ser humano está constantemente expuesto desde el inicio de la vida a la agresión oxidativa, tanto a nivel intracelular como extracelular, pudiéndose atenuar en un grado máximo de la misma por medio de un complejo y extenso sistema de antioxidantes. Además está protegido del estrés oxidativo gracias a la acción de varios antioxidantes que 2 poseen diferentes funciones, algunos son enzimas y proteínas y otros son pequeñas moléculas antioxidantes. Los alimentos son importantes fuentes de tales antioxidantes, componentes y elementos traza, se han desarrollado una gran cantidad de antioxidantes sintéticos y algunos de ellos se emplean como aditivos alimentarios, suplementos y fármacos. Uno de los más populares antioxidantes sintéticos es el 2,6 di ter butil 4- metilfenol (BHT). Sin embargo, suele asumirse que los antioxidantes naturales son más potentes, eficaces y seguros que los sintéticos, por eso los antioxidantes naturales son los más aceptados por los consumidores 5,7. Los antioxidantes naturales como el α-tocoferol, que constituyen el sistema de defensa in vivo, está formado por muchas líneas de defensa. La primera línea consiste en la inhibición de la formación de especies reactivas de oxígeno y de radicales libres a través del secuestro de iones metálicos, por reducción de hidroperóxidos y peróxidos de hidrogeno y por captación de superóxido y oxigeno sínglete. Los antioxidantes que absorben radicales libres actúan como segunda línea de defensa. La tercera línea de defensa está constituida por los mecanismos de reparación de novo y el aclaramientos de los lípidos, proteínas y DNA alterados por la oxidación. Dentro de los principales representantes de la segunda línea está la vitamina liposoluble E y la vitamina hidrosoluble C, ambas captan radicales e inhiben la reacción en cadena o rompen la reacción de propagación. Los compuestos polifenólicos también pueden actuar como potentes antioxidantes absorbedores de radicales 5,7. La vitamina C, es un potente antioxidante hidrosoluble, que en bajas concentraciones reduce los efectos adversos de las especies reactivas del oxígeno, y de nitrógenos implicados en enfermedades cardiovasculares, cáncer, cataratas o enfermedades neurodegenerativas. Además puede regenerar otros antioxidantes como el beta-caroteno o el alfa-tocoferol oxidados por radicales libres, el ácido L-ascórbico (forma reducida) y el L-dehidroascorbico (forma oxidada) de la vitamina C, constituye un sistema de óxido reducción 8. La vitamina E, considerado el lípido antioxidante y juega un papel importante en la protección frente al daño oxidativo de las membranas celulares y delas lipoproteínas. El alfa-tocoferol y el gamma-tocoferol son las dos formas mayoritarias de vitamina E presentes en el plasma y tejidos humanos 8. 3 Para la defensa antioxidativa son fundamentales el aporte alimentario de vitaminas A, C y E, diversos carotenoides como beta-carotenos, flavonoides, licopeno, zeaxantina, etc, y varios compuestos fenólicos. Que actúan tanto a nivel de membrana como intracelular y extracelular 7,9. Son pocos los alimentos que contienen las tres vitaminas en una proporción equilibrada. Encontrándose en el durazno en una porción equilibrada, efecto antioxidante de estas vitaminas favorece el buen estado de las arterias en general, se podría decir que es perfecta para buena salud del corazón, es indicado en casos de estreñimineto, trastornos gastricos, hepaticos, renales y reumaticos, eliminando a la vez impurezas de la sangre, es preventivo contra el cáncer.el durazno, al ser disolvente, posee el más poderoso destructor de los radicales libres 7,9, 10. Participan en la defensa antioxidativa enzimas: catalazas, peroxidasas, y superóxidodismutasa (SOD), eliminando en forma catalítica los intermediarios de la reducción del oxígeno. La SOD elimina de manera catalítica el anión superóxido (O - 2 ); la catalasa, el peróxido de hidrogeno (H 2 O 2 ). Ambas enzimas, las catalasas y peroxidasas, son consideradas hidroperoxidasas, por medio la acción de estas dos enzimas se descompone el H 2 O 2. Las peroxidasas son enzimas vegetales pero también se encuentran en la leche y en los leucocitos; las catalasas están presentes en los animales y vegetales. La catalasa degrada el peróxido de hidrógeno, cuya acumulación es tóxica 11. De las enzimas mencionadas anteriormente, catalasas y peroxidasas, se encuentran como componentes del Aloe vera, que esta compuesto de agua (95%), acidos esenciales, proteinas, glicoides (lectinas), acidos organicos (ácido hexurónico, ácido pteroilglutámico, ácido glucorónico), enzimas(oxidasa, catalasa, amilasa), oxalato de calcio, escualeno, saponinas, esteroidales, etc.entre las principales propiedades farmacológicas del aloe su actividad cicatrizante y emoliente en dermoestética, sumado a la actividad inmuno estimulante de los polisacáridos del gel. El aislamiento de compuestos fenólicos y enzimas (peroxidasas) a partir del gel son de reconocida actividad antioxidante, sumarian un nuevo elemento a la capacidad regenerativa y protectora de la piel. Incluso aplicado a la piel el Aloe vera ha dado muy buenos resultados cicatrizantes en especial en heridas abiertas, tanto el gel y el acíbar han demostrado actividad anti infecciosas y antineoplásica. En el aparato digestivo, extractos totales de Aloe vera administrados a ratas con lesiones 4 ulcerosas gástricas provocadas por estrés y/o etanol, lograban una buena cicatrización de las heridas, a la vez que disminuían la secreción acida gástrica 12. El néctar es una bebida alimenticia, elaborado a partir de la mezcla de pulpa o jugo de una o varias frutas adicionando agua, azúcar, ácido cítrico, conservantes y estabilizadores si fuera necesario,el producto debe ser conservado por tratamiento térmico 13, 14. En el trabajo realizado en la universidad científica del sur. (2008), estudió la capacidad antioxidantes de los néctares de durazno, manzana y mango de varias marcas comerciales que se expenden en el mercado local, demostrando que la mayor capacidad antioxidante de estos néctares se encuentra en la marca frugos, debido a su alto contenido en polifenoles y vitamina C PROBLEMA Tiene la capacidad antioxidante del néctarde Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el DPPH*? 2. HIPOTESIS El Néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) tiene un efecto antioxidante con el DPPH*. 5 3. OBJETIVOS a. Objetivos general: Determinar de la capacidad antioxidante del néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila) In vitrio con el DPPH*. b. Objetivo específicos: 1) Determinar la capacidad antioxidante del néctar de Prunus pérsica (durazno) 2) Determinar la capacidad antioxidante del Aloe vera (sábila). 3) Determinar la capacidad antioxidante del néctar de Prunus pérsica durazno y Aloe vera sábila. 4) Comparar las capacidades antioxidantes del Aloe vera (sábila), del néctar de Prunus pérsica (durazno) y del néctar de Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila). 6 MATERIAL Y MÉTODO 2.1 Materiales, Reactivos y Equipo Materiales: A. Material estudio: Prunus pérsica (durazno) y Aloe vera (sábila). B. Materiales de Laboratorio: Material de vidrio los de uso común en el laboratorio. Tubos de ensayos con tapa rosca de capacidad de 10 ml. Espátula de acero inoxidable. Papel filtro whatman N 1. Papel aluminio 8 m 0,30 m. Guantes quirúrgicos, etc. 1.2 Reactivos: 2, 2 - difenil - 1 -picrilhidrazil (DPPH*) Lab. Aldrich. Ácido cítrico DROPAKSA. Carboximetilcelulosa (CMC) DROPAKSA. Sorbato de potasio DROPAKSA. 1.3 Equipos: Refractómetro modelo ABBE Carl Zeiss. Balanza analítica Sartorius. Balanza de tres brazos Omaus R. PH Metro RMetrohm. Espectrofotómetro UV-Visible Hewlett Packard (8452A-Diode ArraySpectrophotometer). 1.4 Otros: 5 litros de agua hervida fría. 7 2 secadores o manteles. 2 Kg de hielo. 1 colador. 2 ollas de acero inoxidables. Azúcar 2.2 Métodos A. Elaboración y control de calidad de néctares I. Elaboración de néctar 13, 14. a) Selección de la fruta Consisto en seleccionar la fruta de buena calidad: tamaño, color, aspecto, sana y sin abolladuras, (eliminamos las magulladas o podridas y seleccionamos las sanas y de superficie uniforme). b) Pesado de la fruta Consisto en obtener el peso exacto de la fruta. c) Lavado de la fruta Se realizó con la finalidad de eliminar la suciedad y/o restos de tierra adheridos en la superficie de la fruta. Se ha lavado inicialmente con la corriente de agua (directo al chorro), luego sumergimos la fruta en solución desinfectante (V gotas de lejía por litro de agua) durante 5 minutos. d) Escaldado o pre cocción Llamado también blanqueado. En este caso se colocamos a hervir la fruta de la siguiente manera: Se colocó la fruta sin pelar en ollas de capacidad adecuada a la cual previamente se les agregamos suficiente agua. La fruta debe estar cubierta por el agua. Dejamos hervir por espacio de 4 minutos con el fin de inactivar las 8 enzimas presentes en la fruta. Enfriar. e) Pelado y despepitado Una vez enfriado se procedió a pelar la fruta con cuchillo de acero inoxidable y a retiramos las pepas. f) Pulpeado y refinado La fruta pelada se coloca en la licuadora, la cual nos ayudó como pulpeadora casera. El licuado fue de preferencia sin agua. En caso de adicionar agua, debemos conocer la cantidad exacta de agua que se le adiciona. g) Estandarizado 1) Dilución (obtención del jugo): Durazno (62%) y agua (38%) 2) Regulación del azúcar: Pesamos el jugo. Medimos los grados Brix(hacer la lectura 3 veces y sacar el promedio), obteniendo así el grado Brix inicial Los grados Brix finales se obtuvo las tablas establecidas para cada fruta -peso de azúcar que se debe agregar: g Azúcar = W jugo x ( Bf - Bi) / (100 - Bf) Donde: Bi = grados brix iniciales Bf = grados brix finales W = peso del jugo Los grados Brix finales para este néctar es de 13.5 De 1.a concentración del azúcar solo se trabaja con el 75%, el 25% se aparta para mezclarlo con la Carboximetil celulosa y así evitar que se formen grumos facilitando la disolución. 9 Finalmente este proceso de agregado de azúcar nos permite convertir el jugo y llamarlo néctar. 3) Regulación de la acidez: En un papel pesar, exactamente y sin perder nada, 1 g de ácido cítrico. Tomamos en un vaso 100 ml del néctar y procedimos a agregar el ácido cítrico de a pocos hasta obtener un ph de 3.8 (se mide en el ph-metro). Luego pesamos pesar el ácido cítrico para saber cuántos gramos fueron necesarios para obtener el ph 3.8 en 100 ml del néctar. Realizamos los cálculos respectivos para
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