Método enzimático gravimétrico de la AOAC

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  Método enzimático-gravimétrico de la AOAC Se lleva a cabo según el método de Prosky (Prosky y col., 1984; Prosky y col., 1988). Se trata de un método enzimático-gravimétrico de determinación de FA, que se fundamenta en la digestión de las muestras con α-amilasa, proteasa y amiloglucosidasa para eliminar la proteína y el almidón presentes. Este método ha sido adoptado oficialmente por la AOAC y permite determinar por separado FI y FS: Método 991.42 (AOAC, 1995a) y Método 993.19 (AOAC, 1995b). - A
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  Método enzimático-gravimétrico de la AOAC Se lleva a cabo según el método de Prosky (Prosky y col., 1984; Prosky y col., 1988). Se tratade un método enzimático-gravimétrico de determinación de FA, que se fundamenta en ladigestión de las muestras con α-amilasa, proteasa y amiloglucosidasa para eliminar la proteínay el almidón presentes. Este método ha sido adoptado oficialmente por la AOAC y permitedeterminar por separado FI y FS: Método 991.42 (AOAC, 1995a) y Método 993.19 (AOAC,1995b). - Aislamiento del residuo de fibra alimentaria Se pesa una cantidad conocida de muestra en un erlenmeyer de 500 mL (x6), se añaden 50mL de tampón fosfato pH 6, se mide el pH en pHmetro Crison micro pH 2000 y se ajusta, si esnecesario.A continuación se añaden 0,1 mL de α-amilasa, se agita, se cubre el erlenmeyer con papel dealuminio y se introduce en un baño Unitronic 320 OR ( Selecta ) de agua a ebullición durante 30minutos con agitación constante. Se enfría a temperatura ambiente y se añade NaOH 0,275 Mpara ajustar el pH a 7,5±0,1.Se adiciona a continuación 5 mg de proteasa. Se agita, se cubre el erlenmeyer con papelaluminio y se incuba a 60ºC 30 minutos con agitación constante. Se deja enfriar a temperaturaambiente y se añaden 10 mL de HCl 0,325 M. Se mide el pH, que debe oscilar entre 4,5±0,2.Se añaden ahora 0,1 mL de amiloglucosidasa, se agita, se cubre con papel aluminio y seincuba de nuevo a 60ºC, 30 minutos con agitación constante. - Determinación de fibra insoluble (FI) El líquido anterior se filtra sobre un crisol de vidrio de placa filtrante (porosidad nº 2), al que sehan adicionado 0,5 g de celite y que se ha incinerado previamente.Inmediatamente antes de la filtración se añade agua destilada al crisol y se aplica vacío parahumedecer y redistribuir la capa de celite. Una vez efectuada la filtración, se lava el residuo con2 porciones de 10 mL de agua destilada; el líquido fitrado y los lavados de agua se reservanpara la determinación de la fibra soluble.El residuo se lava con 2 porciones de 10 mL de etanol al 95-96% y con otras 2 de 10 mL deacetona. Los crisoles se secan en estufa Memmert  a 105ºC durante toda la noche. Se enfríanen desecador y se pesan. - Determinación de fibra soluble (FS) Los líquidos de filtrado se trasvasan a un erlenmeyer de 500 mL y se añade una cantidad deetanol al 95-96%, previamente calentado, igual a 4 veces el volumen del filtrado. Se deja enreposo durante toda la noche.A continuación los líquidos así obtenidos se filtran en un crisol (porosidad nº 2) con celite (0,5g)previamente pesado e incinerado. Antes de la filtración se redistribuye la capa de celite conetanol al 78%, aplicando vacío para secarla y homogeneizarla.  El residuo obtenido tras la filtración se lava con tres porciones de 20 mL de etanol al 78%, dosporciones de 10 mL de etanol al 95% y dos de 10 mL de acetona. El crisol se deseca en estufaa 105ºC durante toda la noche, se enfría en desecador y se pesa. Esquema I: Aislamiento de un residuo de fibra alimentaria. Separación de FI y FS mediante elmétodo de la AOACEn los residuos insoluble y soluble se determinan proteínas (AOAC, 1995c), en un quemador  Büchi  Digestor Unit, mod. 425 y finalizada la digestión se destila en un destilador  Büchi  Distillation Unit, mod. B-316, y cenizas (AOAC, 1995d) en mufla Carbolite CSF 1100 a 550 ºC. Cálculos  100(%) xM  C  P  RI  FI  −−= donde:RI = residuo insoluble (g)P = proteínas (g)C = cenizas (g)M = peso de la muestra (g) 100(%) xM  C  P  RS  FS  −−= donde:RS = residuo soluble (g)P = proteínas (g)C = cenizas (g)M = peso de la muestra (g)
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