10_membrana_filtrante

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  ã Introducción ã Objetivo ã Fundamento ã Materiales ã Procedimiento ã Resultados ã Conclusiones ã Actividades Adicionales Trabajo Práctico Nº 2 MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA INTRODUCCIÓN ã Bibliografía El agua es un factor importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está presente en otros procesos relacionados con dicha producción, como por ejemplo en
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    ã  Introducción ã  Objetivo ã  Fundamento ã  Materiales ã  Procedimiento ã  Resultados ã  Conclusiones ã  Actividades Adicionales ã  Bibliografía INTRODUCCIÓN El agua es un factor importante en la producción delos medicamentos, por lo tanto su calidad, es de su-ma importancia ya que es la materia prima más usa-da y además está presente en otros procesos rela-cionados con dicha producción, como por ejemplo enlos de limpieza y sanitarización. Es por ello que elagua puede considerarse una fuente potencial decontaminación bacteriana de los medicamentos.En la industria farmacéutica se conocen cinco tiposde agua: agua potable, agua suavizada, agua desio-nizada, agua destilada y agua producida por ósmosisreversa. La calidad microbiológica de cualquier tipo,dependerá del contenido microbiano del agua utiliza-da como materia prima, de los métodos de tratamien-tos a los que es sometida, y de los sistemas emplea-dos para su almacenamiento y distribución.Para garantizar la calidad microbiológica del agua, esnecesario realizar el control de la misma, utilizandodiferentes métodos, que nos permitan realizar la nu-meración o el recuento de bacterias aerobias mesófi-las, mohos y levaduras, coliformes o la investigaciónde microorganismos patógenos. Trabajo Práctico Nº 2MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTEPARA EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICODEL AGUA  LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA ELANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA __________________________________________________________________________________________________  2. 2 OBJETIVO Al finalizar, el trabajo práctico, el estudiante estará en capacidad, mediante la con-sulta bibliográfica y la aplicación de las técnicas microbiológicas, de realizar elcontrol microbiológico del agua de proceso, utilizando la técnica de la MembranaFiltrante. FUNDAMENTO Este método se fundamenta en determinar el número y tipo de microorganismospresentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de lamisma a través de una membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45 μ m de diámetro), la consiguiente retención de los microorganismos sobre dichamembrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al tipo demicroorganismo. MATERIALES Muestra de agua de procesoAgua peptonada al 0,1 %Placas estériles con medio ENDOPlacas estériles con agar SabouraudPlacas estériles con agar CetrimidePlacas estériles con agar MacConkey   Placas estériles con agar para Recuento en Placa (Agar Standard Methods)Equipo de filtración (Millipore)Membranas filtrantes estérilesBomba de vacíoPinzas estérilesEstufa PROCEDIMIENTO 1. Colocar una membrana filtrante estéril, bajo condiciones asépticas, sobre elcentro del portafitro, usando pinzas estériles, con la superficie cuadriculadahacia arriba.  LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA ELANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA __________________________________________________________________________________________________  2. 3 2. Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtración y asegurando conuna pinza.3. Verter 100 mL de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a filtrar.4. Lavar el embudo con aproximadamente 100 mL de agua peptonada al 0,1%.5. Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estéril transferir lamembrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondienteal microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agar endo, bacteriasaerobias mesófilas en agar para recuento en placas, mohos y levaduras enagar Sabouraud y Pseudomonas aeruginosa  en agar cetrimide.6. Al colocar la membrana, evitar la formación de burbujas entre ésta y el mediode cultivo.7. Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesión de la mem-brana al medio.8. Con excepción de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en formainvertida, a las diferentes temperaturas y tiempos, de acuerdo al microorganis-mo investigado:  LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA ELANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA __________________________________________________________________________________________________  2. 4 1. Coliformes: Agar ENDO Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h2. Mohos y Levaduras: Agar Sabouraud Incubación 25ºC ± 2ºC x 5-7 días3. Bacterias aerobias Agar Recuento Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 hmesófilas en Placas4. Pseudomonas aeruginosa  Agar cetrimide Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h RESULTADOS Contar las colonias en las membranas. Expresar los resultados como unidadesformadoras de colonias (u.f.c.) por mL o por 100 mL de agua, considerando el vo-lumen filtrado y el factor de dilución.CARACTERÍSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS RETENIDOS EN LASMEMBRANAS FILTRANTES, DE ACUERDO A LOS MEDIOS USADOS.Bacterias aerobias mesófilas en agar pararecuento en placas.Mohos y Levaduras en agar Sabouraud.Coliformes en agar endo.
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